除蟲菊酯檢測(cè)試劑盒的合成方法

除蟲菊酯檢測(cè)試劑盒由美國abraxis合成，這一項(xiàng)試劑的研究為生物領(lǐng)域帶來了另一類新篇章 。以下是除蟲菊酯檢測(cè)試劑盒的原理，操作步驟，及其注意事項(xiàng)，讓我們來看看除蟲菊酯檢測(cè)試劑盒是怎么合成的吧。

適用
Abraxis合成除蟲菊酯檢測(cè)試劑盒適用于定量檢測(cè)水樣中（底下水，表面水，井水）芐氯菊脂和相關(guān)的合成除蟲菊酯（見后面的交叉反應(yīng)表）。水樣的前處理步驟請(qǐng)看說明書。如果要檢測(cè)土壤，作物，和食品樣品的話請(qǐng)本公司索取相關(guān)資料。
原理
Abraxis合成除蟲菊酯檢測(cè)試劑盒應(yīng)用了酶聯(lián)免疫檢測(cè)原理測(cè)定芐氯菊脂和相關(guān)的合成除蟲菊酯。測(cè)試樣品和包被有合成除蟲菊酯特異性抗體的磁性顆粒一起加入到一次性測(cè)試管中孵育20分鐘。然后添加合成除蟲菊酯酶結(jié)合物。樣品中的合成除蟲菊酯和合成除蟲菊酯酶結(jié)合物相互競(jìng)爭(zhēng)于磁性顆粒上的抗體結(jié)合位點(diǎn)。孵育30分鐘，在反應(yīng)中磁場(chǎng)應(yīng)用于固定測(cè)試管中的順磁顆粒（指結(jié)合合成除蟲菊酯和酶標(biāo)芐氯菊脂復(fù)合物的磁性顆粒，和它們的初始濃度成正比），同時(shí)允許把沒有結(jié)合的試劑處理掉。在倒掉沒有發(fā)生反應(yīng)的試劑后用洗液清洗這些顆粒。通過添加酶底物（過氧化氫）和顯色劑（TMB）可以檢測(cè)到合成除蟲菊酯。結(jié)合到合成除蟲菊酯抗體上的芐氯菊脂酶標(biāo)物催化底物/顯色液混合物產(chǎn)了有色物質(zhì)。經(jīng)過30分鐘的孵育，加入酸溶液終止穩(wěn)定反應(yīng)。因?yàn)槊笜?biāo)芐氯菊脂（結(jié)合物）和沒有標(biāo)記的合成除蟲菊酯（樣品）在反應(yīng)中競(jìng)爭(zhēng)于抗體位點(diǎn)結(jié)合，所以顯色的深淺和樣品中合成除蟲菊酯的濃度成反比。
試劑盒組成
1、包被有合成除蟲菊酯抗體的磁性顆粒。
合成除蟲菊酯抗體（抗芐氯菊脂單克隆抗體）被包被于磁性顆粒上，這些顆粒懸浮于包含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的鹽性緩沖液中。100測(cè)試，1瓶60mL。
2、合成除蟲菊酯酶結(jié)合物。
HRP標(biāo)記的芐氯菊脂類似物被稀釋在包含有保存劑和穩(wěn)定劑的鹽性緩沖液中。100測(cè)試，1瓶30mL。
3、芐氯菊脂標(biāo)準(zhǔn)品
5瓶芐氯菊脂標(biāo)準(zhǔn)品（0.75、2.5、5.0、15.0 ppb)，每瓶2.0 mL，保存于含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的甲醇溶液中。
4、對(duì)照 1瓶2ml
濃度為3.0 ppb 的芐氯菊脂，保存于含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的甲醇溶液中。
5、稀釋劑/零標(biāo)準(zhǔn)
含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的甲醇溶液，不含有任何可以檢測(cè)到的芐氯菊脂。100檢測(cè)，1瓶35mL。
6、顯色溶液
含有過氧化氫和TMB的有機(jī)堿溶液。100檢測(cè)，1瓶65mL。
7、終止液
0.5%的稀硫酸溶液，100檢測(cè)，1瓶60 mL。
8、洗液
加防腐劑的無離子水，100檢測(cè)，1瓶250 mL
9、測(cè)試管
測(cè)試管，每包36支，100檢測(cè)，共3包。

測(cè)試步驟
在操作之前一定要仔細(xì)閱讀以上內(nèi)容。
1、對(duì)于水樣可以直接按此說明書處理，如果是其它樣品顆粒請(qǐng)我公司索取特定的樣品處理方法。
2、標(biāo)記測(cè)試管，使標(biāo)準(zhǔn)、樣品和對(duì)照區(qū)分開。
管號(hào)        1、2        3,4        5,6        7,8        9,10        11        12        13        14
測(cè)試管內(nèi)容物        Diluent/Zero Standard,
0 ppb        Standard1
0.75 ppb        Standard2
2.5 ppb        Standard3
5.0 ppb        Standard4
15.0 ppb        Control        Sample1        Sample2        Sampe3
3、在對(duì)應(yīng)的測(cè)試管中加入250 uL標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)照或樣品。
4、混勻包被有合成除蟲菊酯抗體的磁性顆粒溶液，然后每個(gè)測(cè)試管加入500 uL。
5、渦旋震蕩1到2秒，盡量不要產(chǎn)生氣泡。
6、在室溫下孵育20分。
7、在每個(gè)測(cè)試管加入250 uL合成除蟲菊酯酶結(jié)合物。
8、渦旋震蕩1到2秒，盡量不要產(chǎn)生氣泡。
9、在室溫下孵育30分。
10、在磁性分離架分離2分鐘。
11、用同樣的操作手法輕輕倒出所有測(cè)試管中的液體，并輕輕地把剩余液體吸取干凈。
12、每個(gè)測(cè)試管中加入1 mL洗液，渦旋震蕩1到2秒，再在磁性分離器上分離2分鐘。
13、從分離器上拿起支架，慢慢翻轉(zhuǎn)來傾倒測(cè)試管中的液體，動(dòng)作一定要平緩保證液體是沿著試管的一邊持續(xù)的流出。一直到支架反了過來的時(shí)候放在吸水墊上面使試管壁上的水被吸出。提起來支架然后再放到吸水墊上面，反復(fù)操作幾次確保試管壁上的液體全部被移除。
14、重復(fù)步驟12，13 一次。
15、從分離器上拿下支架，然后每個(gè)測(cè)試管中加入500 uL的顯色液。
16、渦旋震蕩1到2秒，盡量不要產(chǎn)生氣泡。
17、在室溫下孵育30分。
18、在每個(gè)測(cè)試管中加入500 uL的終止液。
19、在一個(gè)干凈的測(cè)試管中加入1 mL洗液，作為步驟20中的空白。
20、在加入終止液15分鐘后，在450nm的分光光度計(jì)測(cè)定。
結(jié)果
手工計(jì)算
1、        計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值。
2、        計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/Bo（每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值除以 稀釋劑/零標(biāo)準(zhǔn) 的吸光度值）。
3、        以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/Bo值的Log 為Y軸，合成除蟲菊酯濃度的Ln為X軸作圖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4、        把樣品或?qū)φ盏?B/Bo插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以計(jì)算出結(jié)果。