冷凍細(xì)胞活化詳細(xì)步驟

冷凍原則：冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。 細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代。其細(xì)胞生長(zhǎng)或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。



一、材料 ：
①37 oC 恒溫水槽 
②新鮮培養(yǎng)基 
③無(wú)菌吸管/ 離心管/ 培養(yǎng)瓶
④液氮或干冰容器 


二、操作步驟： 
①操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。 
②自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過(guò)程，此時(shí)蓋子易松掉。 
③將新鮮培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。 
④取出冷凍管，立即放入37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化，以70%ethanol 擦拭保存管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。 
⑤取出0.9 ml 解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例為1:10～1:15)，混合均勻，放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取0.1 ml 解凍細(xì)胞懸浮液作存活測(cè)試。 
⑥解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑(例如DMSO 或glycerol)，依細(xì)胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除，則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10 ml 培養(yǎng)基之離心管內(nèi)，離心1,000 rpm, 5 分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 
⑦若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。


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