酶標(biāo)板整體背景高該如何處理？

近日，有客戶咨詢公司的業(yè)務(wù)員，ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)板整體背景高有什么好的處理方式嗎？下面就請(qǐng)我司技術(shù)專員為您答疑！



1.結(jié)合反應(yīng)太強(qiáng)或時(shí)間過長：檢查底物的稀釋，使用建議的稀釋度。當(dāng)酶標(biāo)板顯色足夠進(jìn)行吸光度讀取時(shí)立即用終止液終止反應(yīng);


2.底物溶液或終止液不是新配制：使用新配制的底物溶液。終止液應(yīng)該是清亮的(如果它變黃，這是被污染的標(biāo)志，需要重新配制);


3.沒有終止反應(yīng)：如果底物反應(yīng)沒有被終止，顏色會(huì)繼續(xù)變化;


4.酶標(biāo)板在酶標(biāo)儀讀板前放置時(shí)間過長：顏色會(huì)繼續(xù)變化(盡管加了終止液，依然會(huì)以很慢的速度變化)


5.底物孵育過程沒有避光：底物孵育應(yīng)該在避光條件下進(jìn)行;


6.抗體非特異性結(jié)合：確保進(jìn)行了封閉并使用的是恰當(dāng)?shù)姆忾]液。我們建議使用5-10%的與二抗同種動(dòng)物來源的血清或牛血清。確保板孔經(jīng)過預(yù)處理以防止非特異結(jié)合。使用親和力強(qiáng)、純度高的抗體，最好經(jīng)過了預(yù)吸收。


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