什么是質(zhì)粒轉(zhuǎn)化?如何操作呢?

一、基本原理

將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化（ Transformation ）。此感受態(tài)細(xì)菌細(xì)胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態(tài)細(xì)菌的制備，見(jiàn)前）。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于細(xì)菌表面，經(jīng) 42℃ 短時(shí)間熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分lie增殖。被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中，外源基因得到表達(dá)。在選擇性培養(yǎng)平板上，可選出所需的轉(zhuǎn)化子（即含有質(zhì)粒 DNA 的細(xì)菌）。鈣處理的感受態(tài)細(xì)胞，一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ～ 10 6 個(gè)轉(zhuǎn)化子。除化學(xué)方法轉(zhuǎn)化細(xì)菌外，還有電穿孔法（ Electroporation ），其轉(zhuǎn)化率可高達(dá) 10 9 ～ 10 10 個(gè)轉(zhuǎn)化子 /μg 質(zhì)粒 DNA 。


二、實(shí)驗(yàn)器材

1.培養(yǎng)皿 

2.恒溫培養(yǎng)箱


三、試劑

1.LB 培養(yǎng)基

2.選擇性 LB 瓊脂培養(yǎng)平板（含氨芐青霉素，終濃度為 50μg/ml ）

3.氨芐青霉素 100 mg/ml

4.宿主細(xì)菌：經(jīng) 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態(tài)細(xì)菌 DH5α


四、操作步驟

1、取50μL大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，加入適量質(zhì)粒（體積不得超過(guò)4μL）冰浴30min后42℃熱激90s ，馬上放回冰上，冰浴2min ；

2、加400μLLB培養(yǎng)基，于37℃搖床慢搖振蕩培養(yǎng)45-60min；

3、取50-100μL涂在含有氨芐青霉素（100μg/mL）的LB固體培養(yǎng)基上，37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜。

 

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